Les spectres des deux formes acide et basique d'un indicateur coloré…

Explication. Notons $C_A$ et $C_B$ les concentrations des deux formes. Comme l'indicateur ne fait que passer d'une forme à l'autre, la somme est constante : $C_A+C_B=C_{\text{tot}}$. L'absorbance vaut, par additivité,

$$A=\ell ({\epsilon }_A{C}_A+{\epsilon }_B{C}_B).$$

Au point isobestique, ${\epsilon }_A={\epsilon }_B=\epsilon$, donc

$$A=\epsilon \ell (C_A+C_B)=\epsilon \ell C_{\text{tot}}:$$

l'absorbance ne dépend plus de la répartition entre les deux formes, donc plus du pH.

À quoi cela sert. D'une part à doser la concentration totale de l'indicateur sans avoir à contrôler le pH. D'autre part comme test de pureté : si les spectres enregistrés à différents pH ne se croisent pas tous en un même point, c'est qu'une troisième espèce est apparue (dégradation, précipité) — l'hypothèse « deux formes seulement » est prise en défaut.